期刊简介
本刊主要报道医学分子生物学领域的最新研究成果，研究进展有及研究方向，适合于广大从事医学分子生物学研究的科技工作者及临床医务人员，生物工程、生化、分子药理、分子病理、免疫学、遗传学等相关人员。
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首页>医学分子生物学杂志
- 杂志名称：医学分子生物学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院
- 国际刊号：1672-8009
- 国内刊号：42-1720/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：首届、第二届中国高校特色科技期刊奖期刊收录：剑桥科学文摘, 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
生物素修饰蛋白真核表达载体的构建与应用
伦新新；胡志嵩；陈园坤；李昂；张孟德；张明铭；赵晶；杨安钢；阎博
关键词：BirA酶, Avi-tag, 生物素修饰蛋白, 真核表达载体
摘要：目的 构建生物素修饰蛋白真核表达载体pAvi-BirA,并摸索适生物素的添加剂量,提高目的蛋白表达水平和生物素修饰效率,从而优化生物素修饰蛋白制备方法.方法 采用PCR和引物退火的方法,得到BirA基因片段和Avi-tag序列,而后定向克隆至pcDNATM3.1载体骨架上,构建得到生物素修饰蛋白真核表达载体pAvi-BirA.应用PCR方法扩增Her2胞外段-Fc基因片段,定向克隆至载体pAvi-BirA上;将该质粒瞬时转染HEK293F细胞,并在培养液中添加不同剂量的生物素.通过Western印迹检测BirA酶和Her2胞外段-Fc融合蛋白的表达水平以及目的蛋白的生物素修饰效率.结果 经PCR鉴定、 酶切鉴定和基因测序显示pAvi-BirA载体构建成功.Western印迹结果表明pAvi-BirA载体转染HEK293F细胞后,BirA酶在细胞中表达良好.在HEK293F细胞中瞬时转染含有Her2胞外段-Fc基因片段的载体后,融合蛋白得到高效表达,并且能够有效进行生物素修饰.随着生物素添加剂量的增加,目的蛋白生物素修饰比例逐渐升高;当生物素母液(5 mmol/L)添加剂量为2μl/ml时,蛋白生物素修饰水平不再提高.结论 构建了生物素修饰蛋白真核表达载体,优化了生物素修饰蛋白制备方法,为相关领域科学研究提供了可靠的技术基础.
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