期刊简介
本刊主要报道医学分子生物学领域的最新研究成果，研究进展有及研究方向，适合于广大从事医学分子生物学研究的科技工作者及临床医务人员，生物工程、生化、分子药理、分子病理、免疫学、遗传学等相关人员。
往期目录
-
2001
-
2002
-
2003
-
2004
-
2005
-
2006
-
2007
-
2008
-
2009
-
2010
-
2011
-
2012
-
2013
-
2014
-
2015
-
2016
-
2017
-
2018
-
2019
首页>医学分子生物学杂志
- 杂志名称：医学分子生物学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院
- 国际刊号：1672-8009
- 国内刊号：42-1720/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：首届、第二届中国高校特色科技期刊奖期刊收录：剑桥科学文摘, 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
attB位点核心区定点突变对ΦC31整合酶效率的影响
李振海；谢飞；马晴雯
关键词：attB位点, 点突变, 大引物, 整合率
摘要：目的 考察attB位点核心区碱基突变对ΦC31整合酶在真核细胞中催化目的基因整合效率的影响.方法 选取attB位点核心区中可能对ΦC31整合酶效率产生影响的碱基,设计含有相应位点突变的引物,采用大引物法两轮PCR扩增得到含突变碱基的attB片段,将其连入含报告基因的载体pEGFP-N1中得到pEGFP-N1-attBm.以含野生型attB位点的报告基因载体pEGFP-N1-attB作为对照,将上述载体分别与ΦC31整合酶表达质粒共转染HeLa细胞,经过药物筛选、染色、细胞克隆计数后,计算并比较整合效率.结果 成功完成9个含有突变碱基attB位点及报告基因载体的构建.酶切及测序鉴定结果显示每个质粒含1或2个突变碱基.其中6个质粒为目标碱基突变,3个为PCR过程中随机产生的非预期突变.细胞实验结果表明,3个含有突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比无显著性差异,其余6个突变attB报告质粒的整合率与野生型attB相比显著降低(P<0.05),尤其是其中两个attB位点中含有2个碱基突变的报告质粒,整合率降低极为显著(P<0.001).结论 attB位点核心区碱基保守性较强,其中一些关键位点的突变使得整合酶效率降低.
友情链接