期刊简介
本刊主要报道医学分子生物学领域的最新研究成果，研究进展有及研究方向，适合于广大从事医学分子生物学研究的科技工作者及临床医务人员，生物工程、生化、分子药理、分子病理、免疫学、遗传学等相关人员。
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首页>医学分子生物学杂志
- 杂志名称：医学分子生物学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院
- 国际刊号：1672-8009
- 国内刊号：42-1720/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：首届、第二届中国高校特色科技期刊奖期刊收录：剑桥科学文摘, 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
大肠埃希菌嘌呤核苷磷酸化酶基因载体的构建及对胰腺癌细胞的作用
李文林；李克强；饶泽昌；石小玉；赵林
关键词：大肠埃希菌嘌呤核苷磷酸化酶, 自杀基因, 载体, 胰腺癌
摘要：目的 构建大肠埃希菌(Escherichia coli)嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)基因表达载体,研究其生物活性,为肿瘤的基因治疗奠定基础.方法 PCR扩增大肠埃希菌K12的PNP基因,T4连接酶将PNP连接入pMSCV逆转录病毒载体,构建重组逆转录病毒载体pMSCV/PNP.pMSCV/PNP转化感受态大肠埃希菌XL1-Blue,提取pMSCV/PNP,酶切、PCR和测序鉴定.病毒包装细胞293产生重组逆转录病毒pMSCV/PNP,流式细胞仪测病毒滴度.pMSCV/PNP转染胰腺癌细胞BXPC-3,倒置荧光显微镜观察,FACS分离转染阳性细胞(GFP阳性).RT-PCR检测PNP mRNA在胰腺癌细胞BXPC-3 细胞中的表达,MTT法检测PNP基因的生物活性.结果 PCR扩增出大肠埃希菌PNP基因(738 bp),酶切和PCR的电泳条带显示pMSCV/PNP,测序结果正常.293包装细胞产生高滴度(3.6×107 U/ml)重组逆转录病毒pMSCV/PNP.RT-PCR实验结果表明,pMSCV/PNP转染的胰腺癌细胞BXPC-3表达PNP mRNA.前药6-甲基嘌呤-2′-脱氧核苷(MePdR)作用72 h 浓度达1.00 mg/L,BXPC-3/PNP细胞存活率为10.09 %,随着MePdR浓度加大,BXPC-3/PNP细胞存活率继续下降直至为0.结论 构建了pMSCV/PNP载体,获得了表达大肠埃希菌PNP基因的BXPC-3细胞克隆,PNP/MePdR自杀基因系统对胰腺癌细胞BXPC-3有较强的抑杀作用.
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