期刊简介
本刊主要报道医学分子生物学领域的最新研究成果，研究进展有及研究方向，适合于广大从事医学分子生物学研究的科技工作者及临床医务人员，生物工程、生化、分子药理、分子病理、免疫学、遗传学等相关人员。
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首页>医学分子生物学杂志
- 杂志名称：医学分子生物学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院
- 国际刊号：1672-8009
- 国内刊号：42-1720/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：首届、第二届中国高校特色科技期刊奖期刊收录：剑桥科学文摘, 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
重组pEGFP-hSnu114质粒的构建及表达
李晓冬；方建飞；东莉洁；葛林；何津岩；杨洁
关键词：hSnu114蛋白, 重组质粒, 融合蛋白
摘要：目的 将hSnu114基因定向连入pEGFP质粒GFP的下游,使hSnu114蛋白可与绿色荧光蛋白在真核细胞内融合表达.从而为进一步研究hSnu114蛋白的功能奠定实验基础.方法 本实验已经构建PTZ57R/T –hSnu114和pcDNA3.1(-)-hSnu114重组质粒,想要构建pEGFP-hSnu114重组质粒,需通过引入SalⅠ酶切位点,调整N端起始密码子与绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因之间的序列,使其不破坏读码框,融合蛋白正确表达.PCR扩增出hSnu114的第一部份 (SalⅠ～MunⅠ基因序列),从 hSnu114-pcDNA3.1(-)重组质粒回收hSnu114的第二部分(MunⅠ～BamHⅠ片段),定向克隆至T/A载体,构建hSnu114全长(SalⅠ～BamHⅠ)pTZ57R/T重组质粒.采用SalⅠ和BamHⅠ双酶切方法,从重组质粒中获得hSnu114全长,将该基因片段连接入pEGFP质粒.将构建成功的pEGFP-hSnu114质粒,转染入HeLa细胞,荧光显微镜下可观察绿色荧光蛋白表达.进行Western印迹检测.结果 ① hSnu114 SalⅠ～MunⅠ目的片段获取.②将该pEGFP-hSnu114质粒进行双酶切鉴定可见hSnu114全长片段.③转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达.④ Western印迹可检测到pEGFP-hSnu114融合蛋白.结论 ① hSnu114全长成功载入pEGFP质粒.② hSnu114蛋白可与绿色荧光蛋白在真核细胞中融合表达.
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