期刊简介
本刊主要报道医学分子生物学领域的最新研究成果，研究进展有及研究方向，适合于广大从事医学分子生物学研究的科技工作者及临床医务人员，生物工程、生化、分子药理、分子病理、免疫学、遗传学等相关人员。
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首页>医学分子生物学杂志
- 杂志名称：医学分子生物学杂志
- 主管单位：中华人民共和国教育部
- 主办单位：华中科技大学同济医学院
- 国际刊号：1672-8009
- 国内刊号：42-1720/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：首届、第二届中国高校特色科技期刊奖期刊收录：剑桥科学文摘, 国家图书馆馆藏, 万方收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 知网收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), CA 化学文摘(美)
慢病毒载体的构建及其介导的绿色荧光蛋白在胰岛β细胞中的表达
吕京澴；汪振诚；朱剑；王婷
关键词：慢病毒载体, 胰岛β细胞, 转染, 绿色荧光蛋白
摘要：目的 获得能够在大鼠胰岛β细胞中高效表达的慢病毒载体.方法 以PCR的方法扩增绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)片段,并将其通过穿梭质粒装入pLenti6/V5表达质粒,然后用脂质体转染试剂将plenti6/V5 GFP、pLP1、pLP2以及pLP/VSVG转染入293FT细胞,获得的病毒用人纤维瘤细胞系的HT1080细胞进行滴定.然后用一定滴度的慢病毒转导大鼠胰岛β细胞系INS-1,观察转导效率.结果 通过限制性内切酶和琼脂糖凝胶电泳方法,观察到所克隆入pLenti6/V5表达质粒的GFP片段大小正好与PCR扩增出的片段一致.经测序验证,序列与NCBI网站上GFP序列完全一致.转染结果显示,经293FT细胞所产生的慢病毒,转导效率达到80%以上.而在1×106/ml病毒颗粒的情况下,AAV-GFP病毒几乎不能转导β细胞.结论 与同一滴度的AAV-GFP病毒相比,胰岛β细胞的转导效率有非常显著的差异.即慢病毒载体表达系统在对胰岛β细胞转导的能力上,明显优于重组腺辅病毒表达系统.表明慢病毒载体在糖尿病基因治疗中,特别是对胰岛β细胞的转基因工作中,有着良好的应用前景.
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